극저온 공초점 현미경(Cryo Confocal Microscopy)을 사용하여 핵 기공 복합체(NPC) 타겟팅하는 방법

 

 

극저온 공초점 현미경(Cryo Confocal Microscopy)을 사용하여 핵 기공 복합체(NPC) 타겟팅하는 방법

극저온 전자 단층 촬영(cryo electron tomography)을 위해 극저온 라멜라에서 관심 구조를 검색하는 방법

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핵 기공 복합체 (NPCs; Nuclear pore complexes)는 진핵 세포 핵의 외막과 내막을 연결하는 큰 단백질 집합체입니다. NPC는 수백 개의 뉴클레오포린 (NUP; nucleoporin)에서 조립되는데, NUP는 분자의 선택적 핵세포질간수송(nucleocytoplasmic transport)을 가능하게 하는 중심 채널을 형성합니다. RNA와 리보솜 단백질(ribosomal proteins)은 핵 내에서 밖으로 수송되고, 반면 핵 단백질(nuclear proteins)은 세포질에서 번역되며, 신호 분자(signaling molecules)와 지질 등은 핵 안으로 옮겨집니다.

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NPC의 구조적-기능적 관계와 생물 발생 및 회전율의 조절을 더 잘 이해하려면 최대의 해상도로 세포적 맥락에서 구조를 조사하는 것이 중요합니다. 극저온 전자 단층 촬영(cryo ET; cryo-electron tomography)은 세포 구조와 분자적 사회학(molecular sociology)에 대한 통찰력을 제공하지만, 자가 포식(autophagy)을 겪고 있는 NPC와 같이 희귀한 특정 세포 사건을 cryo ET로 선택적으로 검사하려면 추가적인 방법이 필요합니다.

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본 자료에서는 극저온 광학 현미경(cryo light microscopy), 특히 극저온 공초점 현미경(cryo confocal microscopy)으로 극저온 EM 워크 플로우의 신뢰성을 어떻게 향상할 수 있는지 설명합니다.

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개요

♦ 저온 공 초점 현미경을 사용하여 핵 기공 복합체 표적화 (Targeting nuclear pore complexes (NPCs) using cryo confocal microscopy)

♦ 극저온 전자 단층 촬영 (Cryo Electron Tomography)

♦ 극저온 집속 이온 빔 밀링 (Cryo FIB Milling)

♦ 극저온 광학 현미경 (Cryo Light Microscopy)

♦ 공초점 현미경법을 사용한 3차원 타겟팅 워크플로우 (3D Targeting Workflow using Confocal Microscopy)

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극저온 공초점 현미경을 사용한 3차원 타겟팅 워크플로우에서는 EM 그리드와 샘플의 품질을 평가하고 타겟하는 구조의 분포를 분석합니다. cryo TEM에서 추가 조사를 위해서는 최종 FIB 라멜라 내에 관심 있는 구조가 유지되어야 하고, 이 신뢰성을 향상하기 위해 SEM 이미지에 cryo confocal 3D 데이터가 어떤 식으로 투영되는지 확인하실 수 있습니다. 자세한 내용을 아래 버튼을 통해 확인해보세요.

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*출처 Leica Microsystems

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